說明書-氪爾美-MR0511-2-All-in-One High-RTpremix（with dsDNase）（For qPCR）.pdf

【產(chǎn)品概述】

All-in-One High-RTpremix (with dsDNase) (For qPCR) 為全新一代逆轉(zhuǎn)錄試劑盒。本產(chǎn)品在一管內(nèi)融合了基因組去除與RNA逆轉(zhuǎn)錄所需組分，只需加入RNA模板和水即可進行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。產(chǎn)品采用新一代逆轉(zhuǎn)錄酶、dsDNase，配合優(yōu)化的緩沖液，可快速的完成基因組去除和逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。合成的第一鏈cDNA可廣泛用于文庫構(gòu)建、第二鏈合成、雜交、PCR擴增、兼容染料法和探針法qPCR等。

【產(chǎn)品特點】

1. 高熱穩(wěn)定性，反應(yīng)溫度42-55℃，有助于RNA二級結(jié)構(gòu)打開

2. 逆轉(zhuǎn)錄能力強、cDNA合成得率高，片段更長

3. 無RNase H活性，避免第一鏈cDNA合成過程中DNA/RNA雜交體中模板RNA被降解，從而保證第一鏈cDNA合成量和長度

4. 去除基因組DNA，保證定量結(jié)果更加準確

5. 一管式逆轉(zhuǎn)錄試劑，操作簡便，僅需加入RNA模板和水即可進行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)

6. 合成片段≤15 kb

【適用范圍】

1. cDNA合成及文庫構(gòu)建

2. PCR擴增

3. RT-qPCR檢測

【產(chǎn)品組成】

a. 包含Buffer、dNTPs、Random Hexamer Primer / Oligo (dT)20 Primer Mix、Reverse Transcriptase、Ribonuclease Inhibitor和dsDNase。

【第一鏈 cDNA 合成】

1. 在 RNase-free 離心管中配制如下混合液，輕輕混勻并瞬離以下成分：

a. 為保證逆轉(zhuǎn)錄成功，推薦使用 1ug 高質(zhì)量 RNA 模板。

b. 5×All-in-One RT SuperMix于-20℃保存時，有時會形成沉淀，可在室溫短時間放置后，渦旋混勻即可完全溶解。確保試劑混合均勻后再使用。

2. 按照下表所示進行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)：

3. 產(chǎn)物可立即用于 PCR 或 qPCR 反應(yīng)，或在-20℃保存，并在半年內(nèi)使用；長期存放建議分裝后在-70℃保存，cDNA 應(yīng)避免反復凍融。

注：推薦產(chǎn)物cDNA用無菌去離子水稀釋5~10倍后使用。

【注意事項】

防止 RNase 污染

請保持實驗區(qū)域潔凈；操作時需穿戴干凈的手套、口罩；實驗所用的離心管、槍頭等耗材均需保證 RNase-free。